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    當(dāng)前位置：生物測(cè)試 ?  細(xì)胞實(shí)驗(yàn) ? 

    克隆形成

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    項(xiàng)目介紹

    細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，是測(cè)定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法，指單個(gè)細(xì)胞在體外持續(xù)增殖6代以上其后所形成的細(xì)胞群，形成肉眼可見(jiàn)的克隆，通過(guò)計(jì)數(shù)得出克隆形成率，可對(duì)受檢細(xì)胞的增殖潛力作定量分析，可以反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成。常用于抗腫瘤藥物敏感性測(cè)定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。

    樣品要求

    1、平板克隆形成試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，適用于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞（細(xì)胞生長(zhǎng)快慢均可）。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。

    2、軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗(yàn)適用于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞以及繁殖較快的貼壁細(xì)胞。

    3、請(qǐng)?zhí)顚懲暾蜆訂位蛱峁┰敿?xì)的實(shí)驗(yàn)方案。


    項(xiàng)目案例

    光學(xué)顯微鏡下的克隆細(xì)胞

    克隆形成原始圖

    常見(jiàn)問(wèn)題
    1、克隆形成的目的？

    1）通過(guò)對(duì)細(xì)胞處理后在細(xì)胞培養(yǎng)板上的克隆形成能力來(lái)提示處理后細(xì)胞的增殖能力。

    2）評(píng)價(jià)不同殺傷因素(藥物、基因等)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力或群體依賴性的敏感性;

    3）評(píng)價(jià)細(xì)胞在體內(nèi)成瘤性，癌細(xì)胞不一定都可以在體內(nèi)成瘤，但若體外克隆能力越強(qiáng)，即表明體內(nèi)成瘤性越強(qiáng)，算是一種模擬體內(nèi)成瘤的體外實(shí)驗(yàn)。

    2、克隆形成的分類？

    克隆形成依據(jù)采用的培養(yǎng)介質(zhì)的不同，分為平板克隆和軟瓊脂克隆兩類。

    1. 平板克隆形成（Colony formation）：細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中，應(yīng)用于貼壁的細(xì)胞。

    2. 軟瓊脂克隆形成（soft agar colony formation）：細(xì)胞被瓊脂糖掛起來(lái)，主要應(yīng)用于懸浮的腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。

    3、2種細(xì)胞克隆方式，如何選擇？

    根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象和目的選擇，平板克隆檢測(cè)貼壁腫瘤細(xì)胞的增殖能力和致瘤性，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)除了檢測(cè)貼壁細(xì)胞，還能檢測(cè)懸浮腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，具有平板克隆不可取代的優(yōu)勢(shì)。若只是簡(jiǎn)單評(píng)價(jià)貼壁細(xì)胞的增殖能力和群體依賴性，則選擇平板克隆即可。

    克隆形成

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